鲤春病毒血症病毒

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《鲤春病毒血症病毒(SVCV)逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法(SN/T 1152-2002)》是在总结我国在这一领域的实践经验并参考国际上有关检测规程的基础上制定的。本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人:江育林、高隆英、刘荭、史秀杰。
书    名
鲤春病毒血症病毒
作    者
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
出版日期
2003年3月1日
语    种
简体中文
ISBN
155066215006
外文名
Test Method of Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction(RT-PCR)for Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)
出版社
中国标准出版社
页    数
5页
开    本
16
品    牌
北京劲松建达科技图书有限公司

目录

鲤春病毒血症病毒内容简介

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《鲤春病毒血症病毒(SVCV)逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法(SN/T 1152-2002)》由中国标准出版社出版。

鲤春病毒血症病毒文摘

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版权页:
  
  
  
  3.8无水乙醇
  分析纯,使用前预冷到-20℃。
  3.9矿物油
  要求无DNA酶和RNA酶。
  4器材和设备
  4.196孔细胞培养板
  4.2倒置显微镜
  4.3恒温培养箱
  4.4普通冰箱和低温冰箱
  4.5组织研磨器
  4.6离心机和离心管
  4.7 PCR扩增仪
  4.8电泳仪
  4.9微量移液器及吸头
  4.10紫外观察灯
  5 SVC病毒的分离
  5.1 采样
  对有临床症状的鱼,如是体长小于等于4 cm的鱼苗取整条鱼,体长4 cm~6 cm的鱼苗取内脏(包括肾);体长大于6 cm的鱼则取脑、肝、肾、脾。而对无症状的鱼要取肾、脾、鳃和脑组织,成熟雌鱼还需取卵巢液。按GB/T 18088-2000采样。
  5.2样品处理
  应在10℃以下。先用组织研磨器将样品匀浆成糊状,再按1:10的最终稀释度重悬于培养液中。如果在匀浆前未用抗菌素处理过样品,则须将样品匀浆后再悬浮于含有1000 TU/mL青霉素和1000 μg/mL链霉素的培养液中,于15℃下孵育2 h~4 h或4℃下孵育6 h~24 h。7000 r/min离心15 min,收集上清液。卵巢液也要用上述浓度的抗菌素处理以防污染。不必匀浆但需稀释2倍以上。用相同的方法离心卵巢液样品并在以后的步骤中直接用其上清液。
  5.3病毒分离
  对1:10的组织匀浆上清液再作两次10倍稀释,然后将这1: 10,1:100和1:10003个稀释度的上清液以适当体积分别接种到生长约24 h的EPC、CO或者FHM细胞单层中,每孔(2 cm2)的细胞单层最多接种100 μL稀释液。15℃~20℃吸附0.5 h~1 h后,加入细胞培养液。置于18℃±2℃培养。试验中要有2孔阳性对照(接种SVC标准株),和空白对照(未接种病毒的细胞)。
  阳性对照和待测样品都接种细胞后,7d内每天用40倍到100倍倒置显微镜检查。空白对照细胞应当正常。如果接种了被检匀浆上清稀释液的细胞培养中出现细胞病变(CPE),应立即进行鉴定。如果除阳性对照细胞外,没有CPE出现,则在培养7d后还要用敏感细胞进行再传代培养。传代时,将接种了组织匀浆上清稀释液的细胞单层培养物冻融一次,以7000 r/min,4℃离心15 min,收集上清液。将上清液接种到新鲜细胞单层,培养7d。每天用40倍到100倍倒置显微镜检查。
  如果阳性对照也未出现CPE,则必须换用敏感细胞和一批新的组织样品重新进行另一系列的病毒学检查。

  
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